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天天熱點(diǎn)!甲基化分析 診斷 什么?。谆治觯?/h1>

2023-06-26 16:37:46 來源:科技網(wǎng)

1、基因甲基化的檢測方法主要有以下幾種:甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設(shè)計(jì)針對甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR。


(資料圖片)

2、通過電泳檢測MSP擴(kuò)增產(chǎn)物,如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴(kuò)增片段,則說明該位點(diǎn)存在甲基化;反之,說明被檢測的位點(diǎn)不存在甲基化。

3、2、亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。

4、隨后設(shè)計(jì)BSP引物進(jìn)行PCR,在擴(kuò)增過程中尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶,最后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序就可以判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化稱為BSP-直接測序方法。

5、將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進(jìn)行測序,可以提高測序成功率,這種方法稱為BSP-克隆測序法。

6、3、甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性(Methylation-Sensitive Amplified Polymorphism,MSAP)MSAP是利用對DNA甲基化敏感的兩種同裂酶Hpa II和Msp I來對基因組DNA進(jìn)行酶切和連接。

7、由于兩種酶能夠識別相同的限制性酶切位點(diǎn),即CCGG位點(diǎn)。

8、當(dāng)DNA序列中的CCGG位點(diǎn)出現(xiàn)不同程度的甲基化狀態(tài)時(shí),會分別被這兩種酶識別,以有無產(chǎn)物的方式體現(xiàn)出來。

9、4、焦磷酸測序(Pyrosequencing)通過準(zhǔn)確定量單個(gè)連續(xù)的CpG 位點(diǎn)上的甲基化頻率,焦磷酸測序能檢測并定量甲基化水平上的細(xì)微改變。

10、在序列延伸過程中,根據(jù)C和T的摻入量來定量確定單個(gè)位點(diǎn)的C-T比例。

11、因此,不同位點(diǎn)的甲基化變異就能被準(zhǔn)確檢測。

12、由于焦磷酸測序提供了真實(shí)的序列數(shù)據(jù),甲基化狀態(tài)也就以序列形式呈現(xiàn)。

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